【汇划算】细胞凋亡Tunel检测 “电商购物月，全年最低价”

促销价：2600元

促销时间：2020年11月1日-11月30日

活动区域：辽宁省科研用户

细胞凋亡（apoptosis）也被称为“程序性细胞死亡”，是一个生理性的细胞自我毁灭过程，并由基因调控的高度保守的死亡过程，它在维持机体内环境的稳定和防御内外伤害等方面起着重要作用与坏死引起的细胞死亡不同，凋亡是一种由外部因素(外源性)或细胞内因素(内在)影响而产生的生理过程。凋亡细胞形态上表现为细胞萎缩，并具有caspase激活和DNA片段化为特定长度的明显特征，细胞膜在这些过程中仍保持完整。胞膜凸起和小泡形成，导致了“凋亡小体”的产生进而被巨噬细胞或邻近细胞吞噬。不同于坏死，凋亡不引发炎症反应，并且相邻的细胞保持完整。Caspase在细胞凋亡过程中发挥关键的“启动”和“效应”作用。

目前研究组织体内细胞凋亡最广泛采用的手段是通过Tunel试剂盒检测检测早期基因组的断裂，且能通过标记的多少，进行半定量研究。

Promega DeadEnd™Fluorometric TUNEL System ( DeadEnd™ TUNEL 荧光法检测系统)是一种传统的TUNEL检测法，是为在某一细胞群体中对凋亡的细胞进行检测和定量而设计的。DeadEnd™Fluorometric TUNEL 系统检测DNA断裂，后者是很多细胞发生凋亡时的重要生物学信号。该检测系统无放射性，并且可以提供简单、快速、准确的方法在单细胞水平或细胞悬浮液中原位检测凋亡细胞。

TUNEL实验中关键步骤

1.充分脱蜡和水化。脱蜡可以先60ºC20 min，再用使用二甲苯两次5-10min；而水化用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，这些以便后面的结合反应充分、均匀；

2.把握好细胞通透的时间。一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用10-30min，几μm切片用短时间；几十μm切片用长时间，通过摸索达到既不脱片，有能够使后面的酶和抗体进入胞内。

3.适当延长TUNEL反应液的时间。一般是37ºC1 h，你也可以根据你的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至2h，但要结合你最终的背景着色。

4.DAB显色条件的选择。一般DAB反应10min 左右，结合镜下控制背景颜色，最长不超过30min。

5.PBS的充分清洗。在TUNEL反应后和酶标反应后的清洗应十分严格，可增加次数达5次，因为这些清洗直接决定最后切片的非特异性着色。

6.此外，内源性POD的封闭也十分关键。对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染色。